نحوه تهيه محيط كشت ها

آب پپتون: 10gr+1lit+20gr NaCl : با هم مخلوط مي كنيم و با شعله حرارت مي دهيم محيط را تهيه و بعد در لوله هاي كوچك آزمايشگاه به مقدار 10 سي سي مي ريزيم(بدون لوله دورهام) و در اتوكلاو ميگذاريم تا استريل شود و بعد از استريل در يخچال ميگذاريم تا استريل شود و بعد از استريل تا زمان مصرف در يخچال قرار مي دهيم.

محيط كشت TCBS: آب مقطر 88gr+1lit : با هم مخلوط مي كنيم و با شعله حرارت مي دهيم تا به جوش بيايد . تنها محيط كشتي است كه نياز به اتوكلاو ندارد و بعد مي گذاريم تا سرد شود بعد از سرد شدن اين محيط را بصورت يكنواخت بر روي پيپت ها مي ريزيم و بعد از تهيه در يخچال تا زمان استفاده مي گذاريم.

محيط كشت كليكر آريون آگار:ميزان مصرف بر روي محيط كشت به صورت كامل درج شده است اين محيط را بعد از اينكه تهيه كرديم در اتوكلاو مي گذاريم تا استريل شود بعد از استريل محيط در داخل لوله هاي كوچك درب دار (لوله آزمايشگاه با
پنبه )بصورت مورب مي ريزيم .

توجه: اين لوله هاي كوچك درب دار از قبل بايد در فور استريل شده باشد و بعد از ريختن محيط بر داخل لوله هاي درب دار مي گذاريم تا سرد شود و بعد از اينكه سرد شد درب آن را مي بنديم ودر يخچال تا زمان استفاده مي گذاريم .

روش آزمايش :

ابتدا چند سي سي از نمونه آب را بوسيله پيپت در محيط آماده شده پپتون واتر مي ريزيم و در اتوكلاو 37 قرار مي دهيم .

پس از 24 ساعت در آب (7ساعت در فاضلاب ) بوسيله آنس ته گرد از محيط آب پپتون به محيط TCBS به صورت زيگزاگ كشت مي دهيم و بعد در اتوكلاو 37درجه سانتي گراد از
كلني هاي زرد مات مشكوك بوسيله آنس نوك تيز برداشته و به محيط كشت كليكر آريون آگار كشت مي دهيم .كشت در اين مرحله هم عمقي است و هم سطحي . و دوباره به مدت 24 ساعت در اتو 37 قرار مي دهيم .

كشت عمقي :

نحوه كشت بدين صورت است كه با آنس نوك تيز از كلني هاي زرد مات مشكوك برداشته و آنرا در داخل لوله هاي كوچك درب دار كه محيط كليكرآريون آگار ريخته ايم تا عمق فرو مي بريم.

كشت سطحي :

دوباره از كلني هاي زرد مات مشكوك با آنس نوك تيز برداشته به صورت زيگزاگ بر روي سطح محيط كشت كليكر آريون آگار (قسمت مورب ) كشت مي دهيم .

عمق اگر زرد رنگ باشد در نتيجه نمونه آب يا فاضلاب از نظر التور مثبت است . اما براي تعيين نوع التور از كلني هاي محيط كليكر اريون آگار با آنس نوك تيز استريل برداشته و بر روي يك لام كه يك قطره سرم فيزيولوژي در آن ريخته ايم مخلوط مي كنيم سپس آنتي سرم به مقدار يك قطره به آن اضافه مي كنيم و به هم مي زنيم اگر حالت آب لوتاسيون را مشاهده كرديم نمونه مثبت و نوع التور را گزارش مي دهيم.

حالت آب لوتاسيون :

حالتي است مثل اينكه شير بريده مي شود و يا حالتي است كه محيط محكم به هم
مي چسبد و حالت قوام دارد.