آزمایش و تشخیص کلستریدیوم پرفرنژنس
1-1-5- مواد و وسایل مورد نیاز:
1- شیر خشک
2- تورنسل
3- لوله های آزمایش
4-بن ماری
5- دماسنج - پیپت و پوآر
2-1-5-روش آزمایش :
1-در ابتدا باکتریهای دیگر را با گرم کردن نمونه ی آب در بن ماری برای مدت 3 دقیقه در دمای 100 درجه سانتی گراد و یا 10 دقیقه در دمای 80 درجه سانتی گراد از بین می برند، دما را توسط گذاشتن همان حجم آب روی قسمت دیگر بن ماری و کنترل آن توسط دماسنج تعیین می کنند البته این کار را می توان پس از اضافه کردن نمونه به محیط کشت استریل انجام داد.
2-در مرحله ی بعد 12 گرم شیرخشک را در 100 میلی لیتر آب مقطر حل کرده و با حرارت دادن می گذاریم تا شیرخشک حل شود.
3-مقداری تورنسل به آن اضافه می کنیم تا رنگ بنفش ایجاد گردد، سپس داخل لوله های آزمایش حدود 10 میلی لیتر محیط کشت شیرخشک بعلاوه تورنسل می ریزیم ( 9 لوله ای یا 15 لوله ای ).
4-بعد از گذاشتن پنبه در سر لوله ها آنها را در داخل بشر محتوی آب گذاشته و می جوشانیم.
5-اگر روش 15 لوله ای است به هر 5 لوله محتوی محیط کشت به ترتیب میزان 10 ، 1 و 1/0 میلی لیتر نمونه اضافه می کنیم و در انکوباتور به مدت 3 تا 5 روز در دمای 37 درجه سانتی گراد قرار می دهیم. موارد ذیل نشان دهنده ی مثبت بودن آزمایش کلستریدیوم است:
الف) وجود رنگ صورتی در انتهای لوله
ب) انعقاد کازئین و ایجاد حالت گردبادی
ج) رنگ آمیزی و دیدن باسیل های بسیار درشت گرم مثبت
6- برای شمارش به جدول MPN مراجعه و مانند تست احتمالی کلیفرم عمل می کنیم.
با عرض سلام